Как проводится анализ на боррелиоз?

Анализ на боррелиоз – обязательная процедура после укуса клеща. В связи с тем, что клещи все чаще появляются в черте городов, стали не редкостью обращения населения к врачам-инфекционистам с клещевыми укусами.

В большинстве случаев люди опасаются заражения клещевым энцефалитом, совсем забывая, что насекомые являются переносчиками огромного количества опасных инфекций, в том числе и боррелиоза. Как же выявляется данная болезнь, и какие анализы необходимо сдавать?

Полимеразная реакция цепи

Этот анализ является современным способом выявления различного рода заболеваний, в том числе и боррелиоза. В последнее время все чаще отдается предпочтение именно ему. Среди преимуществ можно отметить следующее:

• технологичность забора материала;
• высокая надежность результатов;
• чувствительность диагностики выше, чем у других применяемых методик;
• может не только выявить инфекционного возбудителя, но и определить его количество.

[youtube]AmQCBVc0-Bg[/youtube]

Кроме того, анализ клеща методом ПЦР можно проводить, даже имея его кусочки, а вот для микроскопической диагностики нужно целое и живое насекомое.

Если брать во внимание, что лабораторное высевание культур занимает в среднем от 3-х до 4-х недель, то результаты ПЦР из любого сданного материала можно узнать уже через 2-3-е суток.

Получение положительного результата ПЦР говорит о наличии заражения спирохетой и о том, что в организме происходит развитие болезни Лайма или данный недуг был у пациента раньше.

Есть вероятность ложнопожительного результата анализа ПЦР на клещевой энцефалит и боррелиоз. Такое может произойти на фоне гепатита В и мононуклеоза, в этом случае будут низкие титры антител. Также при наличии сифилиса или возвратного тифа – анализ укажет на высокие титры антител.

Итогом анализа могут быть два варианта – “обнаружено” или “не обнаружено” – это означает, что в организме пациента есть инфекция или ее нет, отрицательный результат может выявиться при содержании незначительного количества фрагментов микробных ДНК.

Для исследования методом ПЦР сдаются различные биологические материалы:

• ликвор – цереброспинальная, или спинномозговая жидкость;
• венозная кровь;
• урина;
• слюнная жидкость;
• соскобы слизистой оболочки;
• кожные чешуйки с места локализации эритемы;
• сыворотка крови.

Иммуноферментное исследование

Данный анализ крови на клещевой боррелиоз не новый и является самым распространенным среди имеющихся способов нахождения в организме инфекционных возбудителей. Это серологическое лабораторное исследование, которое выявляет наличие антител к боррелиям в плазме крови, лишенной фибриногена, т.е. сыворотке. Для этих целей и используется анализ ИФА (иммунноферментный).

Для исследования берется у одного пациента сыворотка с промежутком времени в 3-4-е недели. Это так называемая “парная” сыворотка.

Чтобы результат был максимально точен, необходимо соблюдать определенные правила:

• перед забором анализа лучше избегать стрессов, чрезмерных физических нагрузок;
• за 3-е суток не употреблять алкогольных напитков, жирной, острой пищи;
• перед анализом не стоит принимать каких-либо лекарственных средств, гормональных контрацептивов;
• если используются жизненно важные препараты, то необходимо предупредить об этом лечащего врача;
• нельзя сдавать кровь на иммуноферментный анализ сразу после проведения рентгенологического исследования, УЗИ, физиопроцедур;
• не курить минимум за 3 часа до забора крови;
• рекомендовано перед анализом побыть минут 20 в спокойном состоянии, посидеть;
• кровь забирается на голодный желудок утром (последний прием пищи должен быть не раньше, чем за 6-8 часов до сдачи), необходимо учитывать, что все напитки, кроме воды, особенно содержащие сахар, являются едой.

Кровь на клещевой баррелиоз набирается из вены в стерильную пробирку, иногда используются пробирки со специальным гелем. После забора кровотечение останавливается путем надавливания ватным шариком. Если при повышенной чувствительности кожных покровах образуется гематома, то избавиться от нее поможет согревающий компресс с рассасывающим эффектом.

Если анализ показал наличие IgM, то значит в организме протекает острый воспалительный процесс инфекционного характера. При поздних стадиях заболевания обнаруживается повышенный уровень антител, относящихся к классу IgG. Если последний показатель долгое время не снижается, значит можно говорить о переходе инфекции в хроническую форму.

Расшифровка результатов

Количество антиборрелиозных агентов IgG класса к патогенным микробам, вызывающим боррелиоз:

• показатель до 16 – инфекции нет;
• от 16 до 22 – есть сомнения;
• 22 и выше – результат положительный.

Anti-Borrelia IgM:

• ниже 0,8 – боррелий не обнаружено;
• в рамках 0,8-1,1 – анализ сомнительный;
• выше 1,1 – положительный.

Стоит отметить, что если отрицательный серологический анализ получен в начале развития заболевания, то не значит, что в организме нет боррелиоза. Такая особенность связана с тем, что антитела к боррелиозным антигенам могут определяться только через 3-6 недель после появления типичных симптомов. В этом случае необходима пересдача материала.

При сомнительном результате человеку рекомендуют сдать повторный анализ через 7 дней, так как он чаще всего выявляется на начальной стадии инфицирования или на фоне приема антибиотиков.

Контрольные анализы рекомендуется сдавать в тех же условиях, что и первые, обращаясь к услугам той же лаборатории, обязательно в утреннее время и с соблюдением определенных правил.

У некоторого количества пациентов (в среднем у 7-8%), не имеющих в организме боррелий, анализ повышен. Это бывает в случае развития эндокардита, мононуклеоза инфекционного происхождения или же наличии спирохет другого типа.

Иммуноглобулины М (IgM) могут выявляться через 14-28 дней со времени инфицирования. Их образование происходит перед появлением иммуноглобулинов, относящихся к G классу. Но у некоторых пациентов синтез IgM может происходить с опозданием или же не происходить вообще.

Кровь на клещевой энцефалит и боррелиоз в этом случае сдается не раньше трех недель после укуса.

Культуральный метод

Получение результата основывается на изоляции болезнетворного микроба, в этом случае – боррелии, из биоматериала на питательную среду. Для анализа подходит практически любая жидкость или ткань человеческого организма – кровь, спинномозговая, внутрисуставная, лимфатическая жидкость, ткани биопсии и др.

Боррелии очень требовательные в вопросах культивирования, поэтому ученые долгие годы создавали подходящую среду, котораяносит название Barbour-Stoenner-Kelly.

Основными условиями для успешного культивирования являются:

• получение биоматериала в начале развития инфекции;
• стерильность во время забора;
• скорейшая транспортировка в лабораторию и помещение на питательную среду.

Выявить боррелиоз таким методом удастся только в том случае, если больной еще не начал курс антибиотикотерапии.

Самый точный результата анализа выявляется из биоптатов, полученных с области укуса – в 60% случаев удается изолировать микробы. При хроническом атрофическом акродерматите (ХААД) это процент выше и достигает 90%.

Подобный анализ крови на боррелиоз имеет самый низкий показатель положительного результата – от 1% до 3%, при заборе ликвора или внутрисуставной жидкости эта цифра варьируется от 15 до 25%.

Считается, что культуральная методика, не смотря на все свои преимущества, не подходит для практического использования. Исследование может длиться от 3-х до 10 недель, стоит дорого, а по эффективности все же уступает наиболее современным способам. Чаще всего ее применяют для научных изысканий, для получения боррелиозной биомассы, котораянеобходима для исследовательской деятельности.

Методика Вестерн-блот

На сегодняшний день считается самым точным диагностическим методом для выявления боррелий. Он основывается на аналитическом подходе к определению в материале специфичных белков.

Прежде всего, применяется электрофорез для структурного разделения белков. Затем их переносят на специальную мембрану, а после применяются детекторы с антителами, специфичными к данному белку.

Вестерн-блоттинг отличается от предыдущего метода тем, что серологическое исследование определяет общее количество антител, специфического и неспецифического характера. Тестирование может дать положительный результат из-за того, что в анализе присутствуют антитела к неспецифическим антигенов.

Методика же Вестерн-блота высокоспецифичная. Выявляя антитела, она определяет против какого типа возбудителя они вырабатываются. Это позволяет исключить влияние на результат анализа перекрестных реакций, связанных с неспецифичными антигенами.

Если рассматривать чувствительность, белковый блоттинг несколько проигрывает анализу ИФА, например, когда в организме пациента присутствует вирус иммунодефицита, он может дать отрицательный ответ.

Возможность получения ложноположительного результата в иммуноферментном исследовании при наличии ВИЧ требует комплексной диагностики, учитывая ИФА, Вестерн-блоттинг, клиническую картину и эпидемиологическое состояние.

Анализ на иммуноглобулин G.

В этом случае кровь на боррелиоз берут, чтобы определить стадию развития инфекции, иммуноглобулин отвечает за вторичный ответ иммунной системы. Существует 3 фазы: острое развитие, хроническое и инфекционное. В норме показатели результата должны быть следующими:

• у взрослых пациентов – от 7 до 16;
• подростков от 11 до 16 лет – от 6,98 до 15,6;
• детей от 5 до 10 лет – от 5,04 до 9,16;
• детей от 2-х до 5 лет – от 4,53 до 9,16.

Пониженное количество иммуноглобулина G может сигнализировать о наличии иммунодефицита.

Метод реакции непрямой флюорисценции (РНИФ).

Этот способ позволяет выявлять антитела к возможным антигенам, путем окрашивания биоматериала флюорохромом и изучения его под микроскопом с люминесцентным освещением.

Обладает некоторыми преимуществами перед методом РИФ, т.к. может не только выявить антигены, но и определить титры антител. Повышенная чувствительность этого метода позволяет, применяя одинаковую сыворотку, обнаруживать различные антигены вирусного и бактериального происхождения.

На первом этапе исследования антитела взаимодействуют с антигеном, на втором происходит ферментативная индикация антигенов.

Прямая микроскопия.

Для данного анализа сдается кровь, ликвор, ткани, полученные путем биопсии, клещевой гомогенизат. Результаты микроскопического исследования не совсем достоверны, после окрашивания микробы утрачивают структурность и сложно определить: патогенные они или нет. Для данного метода при низком содержании боррелий в крови нередко биологическую жидкость концентрируют, пропуская ее через центрифугу.

При данном способе выявления баррелиоза присутствует вероятность ложноотрицательного результата.

Когда и как проходят диагностику?

Все вышеперечисленные диагностические методы используются в разные периоды развития болезни.

Анализ ПЦР проводят через 1,5 недели после возможного инфицирования, иммуноферментное исследование и РНИФ – через 30 дней.

Учитывая нюансы каждого способа, необходимо, чтобы расшифровкой результатов занимался инфекционист с опытом, иначе высоки риски получить недостоверную информацию.

[youtube]fjNOIeBSKHA[/youtube]

Следует посетить местную поликлинику или сразу же обратиться в лабораторию, занимающуюся подобными исследованиями. Необходимо сдать анализ крови на энцефалит и боррелиоз, для этого понадобится венозная кровь.

В целях профилактики клещевого боррелиоза и энцефалита рекомендовано использовать во время нахождения в лесной зоне специальные противоклещевые средства, одевать плотную одежду, покрывающую все тело, имеющую на руках и ногах манжеты, не пренебрегать головным убором.